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紫景天对实验性牙周炎牙周组织病理作用的研究

添加时间:2018-05-03 09:56
  牙周炎 (CP) 是一种慢性炎症性疾病, 是由龈下微生物和宿主防御之间的稳态破坏引起[1], 当牙周组织被破坏时, 牙周袋内的微生物负荷压倒系统的主动防御机制[2].针对此种状况, 目前国内外对牙周炎的药物治疗主要是牙周袋内用药, 而此类药物主要以抗生素为主, 近几年研究显示抗生素的长期使用可加快细菌的进化, 出现耐药菌株, 也可破坏人体内正常菌群, 造成菌群失调等副作用。因此, 我们进行了紫景天总黄酮凝胶对实验性牙周炎牙周组织病理作用的相关研究。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 试剂及仪器
  
  二甲苯 (北京化工厂, 批号:110315) ;冰醋酸 (西陇化工股份有限公司生产, 批号:120302) ;磨牙机 (吉林大学中日联谊医院口腔科提供) ;Wistar大鼠, 体重180-230g, 雌雄各半 (吉林大学实验动物中心提供) .
  
  1.2 样品的纯度、来源
  
  浓度分别为1.0%、0.5%、0.25%的紫景天总黄酮凝胶;基质16%泊洛沙姆407 (吉林省中医药科学院制剂室, 批号:20120725) 以及阳性对照组药物:复方牙痛酊 (贵州同济堂制药有限公司, 批号:20120102) .
  
  1.3 丝线结扎加牙龈卟啉菌感染复合法建立大鼠实验性牙周炎模型
  
  取Wistar大鼠60只, 雌雄各半, 分笼圈养, 随机取出50只大鼠, 用牙龈卟啉单胞菌的盐水预处理2小时后的4号无菌丝线若干, 双股在同一位置打结3次后, 再穿过大鼠的第一和第二磨牙之间的间隙, 再将丝线环绕过第一磨牙, 于其腭侧间隙结扎, 然后打结3次, 将打好的结头埋入牙龈组织下, 以便使线结持续刺激到牙龈组织。在第3, 5, 7天将等量牙龈卟啉单胞菌的盐水注射到大鼠颊腭侧埋有丝线结头的龈下, 于处理大鼠后的第3周通过国际通用标准和观察牙龈症状评价牙龈指数并记录牙龈指数。第4周随机取动物2只, 通过获取打结部位的上颌磨牙及其牙周组织进行病理组织学观察, 以确认实验组大鼠模型的成立。
  
  1.4 紫景天总黄酮对实验性牙周炎的治疗作用
  
  1) 未处理的10只大鼠为正常对照组 (A组) :对牙龈不做任何处理, 其他方面同模型组大鼠。将上述大鼠实验性牙周炎模型动物随机的分成4组:模型对照组 (B组) 以及阳性对照药复方牙痛酊组 (C组) .根据紫景天总黄酮给药的剂量的不同浓度分为实验D组 (给予1.0%紫景天总黄酮) , 实验E组 (给予0.5%紫景天总黄酮) 及实验F组 (给予0.25%紫景天总黄酮) , D、E和F组分别牙龈涂擦紫景天总黄酮, 每日2次, 0.5 ml/次/只, 次间隔8h, 连续涂药14天。C组牙龈涂擦复方牙痛酊, 方法同紫景天药物实验组。
  
  2) 牙龈指数 (GI) 和龈沟出血指数 (SBI) :于给药后第15天, 以3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉, 观察并记录药后牙龈指数及龈沟出血指数, 然后腹主动脉取血, 测量血清中的超氧化物歧化酶 (SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH) 、丙二醛含量 (MDA) .
  
  3) 牙周组织病理学观察:在实验开始后的第5周处死各组大鼠进行观察, 首先将获取的上颌骨标本, 经PBS (pH=7.2) 溶液清洗2遍后, 用10%甲醛固定上颌骨标本24h, 将标本浸泡在70%乙醇溶液中, 将组织修正后, 通过脱钙、梯度脱水、石蜡包埋技术处理组织, 然后将牙齿进行平行于牙长轴的近远中方向切片处理, 获取牙体牙周联合切片, 厚度约为5μm.将切片进行苏木素-伊红 (HE) 染色, 通过光镜组织学观察并记录组织学变化, 分析结果。
  
  2 结果
  
  2.1 外部行为观察和组织病理学检查
  
  由图1结果所见, 肉眼观察:正常对照组动物 (如图A组) 牙龈色粉红, 质韧, 菲薄且紧贴牙面;模型组动物可见牙面上有大量牙石菌斑, 且牙龈色暗红质地疏松, 探之易出血, 牙周袋形成。第4周处死两只动物, 取牙及牙周组织进行病理组织学检查, 确认“牙周炎模型”复制成功。第5周开始给药, 此时模型组动物组, 牙周袋可见进一步加深, 内有食物残渣聚集, 牙龈组织出血、糜烂、溢脓等症状加重;给药两周后观察可见模型对照组 (B组) 症状加重, 紫景天药物实验组 (D、E、F组) 及阳性对照药复方牙痛酊组 (C组) 动物牙龈颜色变浅, 出血减少, 牙周袋变浅。
  
  正常对照组动物 (A组) 牙周软组织细胞大小、形态及分布正常, 镜下可见大鼠的牙周膜的附着点位于其牙齿的釉牙骨质界处, 牙槽骨的骨小梁排列致密, 且不可见牙槽骨吸收破坏等变化。模型组对照组 (B组) 牙周组织可见大量炎性细胞;沟内上皮出现糜烂溃疡, 上皮部分向根方向增生, 牙周膜附着位于釉牙骨质界下方, 可见深牙周袋形成;牙槽骨内发现骨吸收陷窝, 判断出现破骨细胞性骨吸收, 并可见中重度牙周炎的组织病变。阳性对照复方牙痛酊组 (C组) 大鼠的牙周组织虽然依然有炎性细胞的浸润, 但是其数量明显减少。C组病理变化与阳性药相似;F组大鼠的软组织中炎性细胞的浸润可见明显减轻, 牙槽骨吸收状态处于静止期, 可见牙槽骨中的破骨细胞有明显减少, 且牙槽骨周围可见大量的成骨细胞增生, 并且有新生纤维结缔组织大量生成, 牙周袋的变化显示变浅或消失, D组炎性病变明显大于E组, 而E组变化明显大于F组, 但是D、E、F组炎性变化明显小于B组, 这些显示牙周组织正处于修复阶段。
  
  2.2 对实验性牙周炎大鼠牙龈指数、龈沟出血指数的影响
  
  由图2、3结果可见, 紫景天总黄酮1.0%和复方牙痛酊均可明显降低牙龈指数及龈沟出血指数, 明显减轻牙周炎损伤程度, 与模型对照组比较均有显着差异, 对大鼠“实验性牙周炎”有明显的治疗作用。
  
  2.3 对实验性牙周炎大鼠血清中SOD、GSH、MDA的影响
  
  由图4、5结果可见, 模型组血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶比对照组明显降低, 丙二醛含量明显升高, 紫景天总黄酮1.0%、0.5%和复方牙痛酊均可明显升高大鼠血清中超氧化物歧化酶 (P<0.01) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (P<0.05) , 降低丙二醛含量。表明紫景天总黄酮及复方牙痛酊均可明显减轻对大鼠“实验性牙周炎”的损伤程度, 对实验性牙周炎具有显着的治疗作用。
  
  3 讨论
  
  尽管在目前的医学和整体健康教育方面有了长足的进步, 但是慢性牙周炎仍然是一种广泛的疾病, 失去牙齿是这种特殊疾病最严重的并发症[3], 该病的特点是由于牙周韧带和相邻支撑骨的破坏而失去临床附着。它普遍存在于成人之中[4], 它的主要病理变化为牙槽骨的病理性吸收。现如今对牙周炎治疗的药物, 主要着力于控制或消除炎症并且进一步促进牙周组织的再生成。临床上主要应用药物是用于控制炎症并且阻断牙槽骨吸收和促进骨再生。目前临床上牙周炎的药物治疗主要是针对牙菌斑细菌的抗生素的治疗方法, 此类治疗药物对于治疗牙周炎有较好的疗效, 但是如果长期使用易导致耐药细菌的增多, 从而导致口腔内菌群的失调, 某些药物也可同时引起胃肠道刺激性等毒副作用。因此需研究并且开发高效低毒的牙周炎治疗的药物以应用在临床治疗中。因此我们进行了紫景天对实验性牙周炎牙周组织的病理作用的研究, 以给相关研究提供相应证据。
  
  通过本研究, 我们发现紫景天总黄酮可以减轻牙周炎的病理性损伤, 抑制牙周炎中的牙槽骨吸收。在大鼠实验性牙周炎的观察中可见对牙周炎有明显的预防和治疗作用。本研究可为众多牙周病患者带来福音, 推动长白山野生药材资源开发, 本研究成果应用前景广阔, 将对提高社会效益和经济效益具有重要的意义。
  
  参考文献
  
  [1]Sanz M, van Winkelhoff A J.Periodontal infections:understanding the complexity-consensus of the Seventh European Workshop on Periodontology[J].Journal of Clinical Periodontology, 2011, 38 (11) :3.  
  [2]Teughels W, Dekeyser C, Essche M V, et al.One-stage, fullmouth disinfection:fiction or eality?[J].Periodontology, 2009, 50 (1) :39.  
  [3]Duki S, Matijevi S, Dakovi D, et al.Comparison of cefixime and amoxicillin plus metronidazole in the treatment of chronic periodontitis[J].Vojnosanitetski Pregled, 2016, 73 (6) :526.  
  [4]Aimetti M, Perotto S, Castiglione A, et al.Prevalence of periodontitis in an adult population from an urban area in North Italy:findings from a cross-sectional population-based epidemiological survey[J].Journal of Clinical Periodontology, 2015, 42 (7) :622.
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